دانلود پاورپوینت آزمایشگاه مبانی بیو شیمی

کاربرد اسپکترو فتو متری در بیو شیمی

1 – اسپكتروفتومتری

بوسیله اسپكتروفتومتر شدت رنگ محلولها را با دقت اندازه گیری می كنند.

دستگاههائی كه برای رنگ سنجی به كار برده می شوند الكتروفتومترو یا اسپكتروفتومتر نامیده می شوند. 

 شمای ساده زیر قسمتهای مختلف یك الكتروفتومتر را نشان می دهد.

بطور كلی هر اسپكتروفتومتر:

• یك منبع نورانی،

•یك وسیله ایجاد نور تكرنگ با طول موج مشخص

• یك سلول یا لوله مخصوص برای جادادن محلول رنگی

•، یك سلول فتوالكتریك و یك گالوانومتر دارد.

اندازه گیری غلظت یك محلول

  به دو روش می توان غلظت یك محلول را اندازه گیری كرد:

الف) از راه اندازه گیری نوری كه از محلول رنگی خارج می شود و

به آن ،Transmitance   ،یا عبور می گویند؛

ب) اندازه گیری مقدار نوری كه جذب محلول رنگی می شود و به آن دانسیته اپتیك   (OPTICAL DENSITY) O.D یا آبسوربنس می گویند. 

الف) دانسیته اپتیك یا آبسوربنس

نوری كه از یك محلول رنگی عبور می كند مقداری از آن جذب محلول رنگی می شود .

اگر Io شدت نور اولیه و I شدت نور خارج شده از محلول باشد بنابراین  I a شدت نوری است كه جذب محلول رنگی گردیده است.

Ia= I  - Io

Log Io   - log I =OD = Absorbanc              

logI/I0=OD                                

 (1)         log I0/I=OD

جذب از دو قانون پیروی می كند:

مطابق قانون بیرولامبرت (BEER & LAMBERT) هنگامیكه نور یك رنگ از محلول رنگی عبور میكند مقدار نوری كه به وسیله محلول جذب می شود ویا مقدار نوری كه از محلول خارج می شود؛

به غلظت ماده رنگی موجود در محلول

به ضخامت لوله ایكه نور از آن عبور كرده بستگی دارد گردد.یعنی: 

OD=KCL= جذب